„დნმ-კომეტის“ მეთოდით მიღებული კომეტის მსგავსი ობიექტების გამოსახულების დამუშავებისა და ანალიზის მეთოდი. მეცნიერებისა და განათლების თანამედროვე პრობლემები წარმოშობით შვედეთიდან
გელის ზედაპირზე მრავალი მიკროსკოპული „ჭის“ მასივი, რომელთაგან თითოეული შეიცავს საანალიზო უჯრედს.
გავლენის ქვეშ ელექტრული ველიგელში მოთავსებული უჯრედები იწყებენ მოძრაობას და ტოვებენ კვალს, რომელიც მოგვაგონებს კომეტის კუდს. უფრო კაშკაშა და გრძელი „კუდები“ მიეკუთვნება დნმ-ის ყველაზე დიდი დაზიანების მქონე უჯრედებს.
ჩვენი დნმ მუდმივად ემუქრება რადიაციის, ულტრაიისფერი სხივების, ჩვენი საკვებისა და გარემოს დამაბინძურებლების საფრთხის ქვეშ. ყველა ამ ფაქტორს შეუძლია ზიანი მიაყენოს ჩვენს გენეტიკურ მასალას, გამოიწვიოს კიბო და სხვა დაავადებები.
დნმ-ის დაზიანების ანალიზს გადამწყვეტი მნიშვნელობა აქვს ამ დაავადებების ბუნების გასაგებად და ახალი სამკურნალო საშუალებების მოსაძებნად, მაგრამ დნმ-ის დაზიანების გამოვლენის თანამედროვე მეთოდები მოითხოვს დამღლელი და შრომატევადი სამუშაოს. თუმცა, MIT-ის ბიოინჟინრების ჯგუფი შეიქმნა ახალი გზასწრაფად აღმოაჩენს დნმ-ის დაზიანებას სხვადასხვა პირობებში, რაც გვპირდება, რომ ასეთი ანალიზი რუტინულ მეთოდად აქციოს წამლების სკრინინგსა და გარემოზე ზემოქმედების ეპიდემიოლოგიურ კვლევებში.
შემოთავაზებული ტექნიკა ეფუძნება 30 წლის წინანდელ ტესტს, რომელიც ცნობილია როგორც Comet DNA მეთოდი. ამ ტესტს დაარქვეს კომეტის ფორმის ნაცხი, რომელსაც დაზიანებული დნმ წარმოქმნის. მაგრამ ტრადიციული მეთოდისგან განსხვავებით, ახალი ტექნოლოგიის დახმარებით შესაძლებელია ბევრად უფრო დიდი რაოდენობის უჯრედების ანალიზი და ამის გაკეთება ბევრად უფრო სწრაფად.
ტექნოლოგიას შეუძლია ეპიდემიოლოგებს შესთავაზოს ახალი მიდგომა, რათა აღმოაჩინონ გარემოსდაცვითი საფრთხეები კიბოს გამომწვევი დიდი ხნით ადრე, ექიმებს კიბოს მკურნალობის გაუმჯობესების გზა, ხოლო ფარმაცევტული ინდუსტრიის მკვლევარებს ახლის პოვნა. წამლებიდა საშიში ნარკოტიკების იდენტიფიცირება.
„ჩვენი ტექნოლოგიის ყველაზე მნიშვნელოვანი მახასიათებელია ის, რომ ის შეიძლება გამოყენებულ იქნას გარემოში გენოტოქსიკური (მუტაციის გამომწვევი) ნივთიერებების აღმოსაჩენად ძალიან მარტივი კვლევითი აღჭურვილობის გამოყენებით“, - ამბობს ბევინ ენგელვარდი, ბიოინჟინერიის ასისტენტ პროფესორი და ერთ-ერთი თანაავტორი. ქაღალდი.
გენოტოქსიკურობა, ანუ კონკრეტული ნაერთის მავნე მოქმედება გენომზე და კანცეროგენულობა დაკავშირებული ფენომენებია. დნმ-ის კომეტის მეთოდი საშუალებას გაძლევთ შეაფასოთ გენომიური დნმ-ის დაზიანების ხარისხი, როგორც ექსპერიმენტულად, ასევე შიგნით სამეცნიერო მიზნებიდა გადაჭრისას პრაქტიკული პრობლემები: გარემოს ან სამუშაო პირობების გავლენის შეფასება, გადანერგვის მასალის კონტროლი დათბობის დროს, ქსოვილების ინჟინერიაში. დნმ-ის კომეტის ტესტით გამოვლენილი დნმ-ის დაზიანება შეიძლება მიუთითებდეს კიბოსადმი მიდრეკილებაზე და მასთან დაკავშირებულ ცვლილებებზე. სიმსივნური უჯრედებისთვის დამახასიათებელია დნმ-ის დაზიანების აღმოჩენილი დნმ კომეტების ზრდა. და, მიუხედავად იმისა, რომ მისი შემუშავებიდან ათწლეულების განმავლობაში, მეთოდი ფართოდ გავრცელდა მხოლოდ სპეციალიზებულ სფეროებში, მას შეუძლია იპოვნოს გამოყენება დიაგნოსტიკისა და მკურნალობის მონიტორინგში. სხვადასხვა დაავადებები. დნმ კომეტების უპირატესობებია მგრძნობელობა, დაბალი მოთხოვნები მასალის რაოდენობაზე, სწრაფი ოპერაციული პროტოკოლი, შედარებითი სიმარტივე და დაბალი ღირებულება.
დნმ-ის კომეტის მეთოდი გამოიყენება სხვადასხვა ტიპის უჯრედების შესასწავლად, როგორც კულტურაში, ასევე ბიოლოგიური სითხეებისა და ქსოვილების ნიმუშებში. დნმ-ის კომეტის ანალიზის მთავარი მოთხოვნაა ქსოვილის უჯრედების გადატანა სუსპენზიაში, ამიტომ ლაბორატორიული ცხოველების გაკვეთისას ამოღებულმა ორგანოს ფრაგმენტებმა უნდა გაიაროს შესაბამისი დამუშავება და სისხლში ან სპერმაში შემავალი უჯრედები შეიძლება უშუალოდ გამოიკვლიოს. ავთვისებიანი ნეოპლაზმების 80% ეპითელური წარმოშობისაა. ეპითელიები, რომლებიც ექვემდებარება როგორც გარე ზემოქმედებას, ასევე სხეულის შიდა გარემოს ზემოქმედებას, ყველაზე შესაფერისია გენოტოქსიურობის შესაფასებლად დნმ-ის კომეტის მეთოდით. ადამიანის ეპითელიუმის უჯრედების მიღების არაინვაზიური გზაა პირის ღრუს ეპითელიუმის ნაცხი და საცრემლე სადინრის ეპითელიუმიდან ექსფოლიაციური მასალის შეგროვება. პირის ღრუს ეპითელური უჯრედები ცოცხლობენ 10-14 დღეს, მათში დაზიანებული დნმ-ის არსებობა მიუთითებს გენოტოქსიური ნაერთების ბოლოდროინდელ ზემოქმედებაზე. პირის ღრუს ეპითელური დნმ-ის მთლიანობის კვლევები ხელს შეუწყობს მათთან დაკავშირებული ნივთიერებების ზემოქმედების მონიტორინგს პროფესიული საქმიანობადა კვების პროდუქტები.
მინაზე აგაროზაში მოთავსებული უჯრედები მუშავდება ლიზისის ხსნარით და, საჭიროების შემთხვევაში, გარკვეული დარღვევებისთვის სპეციფიკური ფერმენტებით. გამოყოფა ხორციელდება ტუტე ბუფერში. დნმ ტოვებს უჯრედს და გადადის ანოდში, აყალიბებს კვალს, რომლის დანახვა შესაძლებელია ფლუორესცენციული მიკროსკოპის გამოყენებით. რაც უფრო მეტი შესვენება ხდება დნმ-ში, მით უფრო გამოხატულია მისი ფრაგმენტების მოძრაობა. პროცედურის შემდეგ, სლაიდები განეიტრალება და შეღებილია ინტერკალირებული საღებავებით დნმ-ის ვიზუალიზაციისთვის. დნმ-ის ელექტროფორეზული მობილობის შეფასება ხორციელდება ფლუორესცენტული მიკროსკოპის გამოყენებით. როდესაც პრაქტიკულად მთელი უჯრედის დნმ ფრაგმენტულია, ეს ჩვეულებრივ მკვდარი უჯრედია. თუ ცალკეულ უჯრედებს აქვთ ამ ხარისხის გენომიური დაზიანება, ისინი გამოირიცხება ანალიზიდან.
ყველაზე ხშირად გამოყენებული ტუტე დნმ-ის კომეტის პროტოკოლი (გამოყოფა pH > 13-ზე) საშუალებას იძლევა გამოავლინოს ერთჯაჭვიანი რღვევები, ჯვარედინი კავშირები დნმ-ში და დნმ-სა და ცილებს შორის. ნიმუშის მომზადებისას ტუტეებით მკურნალობის გამოყენება ზრდის მეთოდის მგრძნობელობას, ვინაიდან გენოტოქსიური აგენტების უმეტესობა არ იწვევს ორჯაჭვიან რღვევებს დნმ-ის ჯაჭვებში, მაგრამ ქმნის ერთჯაჭვიან რღვევებს ან ტუტეების მიმართ გაზრდილი მგრძნობელობის მქონე უბნებს. გარდა ამისა, გამოიყენება ფერმენტები, რომლებიც ქმნიან რღვევებს დნმ-ის უბნებში სპეციფიკური დაზიანებით. ფორმამიდოპირიმიდინის დნმ გლიკოზილაზა ჭრის დნმ-ის ძაფებს დაჟანგული ნუკლეოტიდების, ფორმამიდის პირიმიდინების (ადენინი და ღია რგოლის გუანინი) და გუანინის სხვა წარმოებულების რეგიონში; OGG1 აღმოაჩენს დაჟანგულ პურინებს და ფორმამიდოპირიმიდინებს, ენდონუკლეაზა III აღმოაჩენს დაჟანგულ პირიმიდინებს, T4 ენდონუკლეაზა V ამოიცნობს პირიმიდინის დიმერებს, 3-მეთილადენინის დნმ გლიკოზილაზა II (AlkA) სპეციფიკურია 3-მეთილადენინისთვის; და ურაცილის დნმ გლიკოზილაზა აღმოაჩენს ურაცილს, რომელიც შეცდომით არის ჩართული დნმ-ში. მასალის დამუშავების ასეთი პროტოკოლები შეიძლება საჭირო გახდეს კონკრეტული პრობლემების გადასაჭრელად, მაგალითად, გაყინულ ქსოვილებში ოქსიდირებული პირიმიდინებისა და T4 ენდონუკლეაზა V ადგილების შემცველობა იზრდება, მაგრამ სხვა დარღვევები არ შეინიშნება. ტრანსპლანტაციის წინ ტრანსპლანტაციის მდგომარეობის შესაფასებლად შეიძლება გამოყენებულ იქნას დნმ კომეტის მეთოდი შესაბამისი ფერმენტით დამუშავებით.
კლინიკური დიაგნოსტიკის ერთ-ერთი სფერო, რომელშიც გამოიყენება დნმ-ის კომეტის ტექნოლოგია, არის მამაკაცის უნაყოფობის დიაგნოზი. სპერმის სტრუქტურიდან გამომდინარე, იზრდება ამ უჯრედებში დნმ-ის სტრუქტურის დაზიანების რისკი და აღდგენითი სისტემები სრულად არ ანაზღაურებს წარმოშობილ დარღვევებს. მამრობითი უნაყოფობის დროს შეინიშნება სპერმის დნმ-ის დაზიანების გაზრდილი ხარისხი. სპერმაში დნმ-ის რღვევების რაოდენობა ჩვეულებრივ აღწევს ~ 10 6 - 10 7 გენომზე, როგორც ადამიანებში, ასევე ლაბორატორიულ თაგვებში, რაც ბევრად აღემატება გენომის რღვევების რაოდენობას ლიმფოციტებში ან ძვლის ტვინის წითელ უჯრედებში. დნმ-ის დაზიანების შემცველი სპერმატოზოიდით განაყოფიერება ააქტიურებს კვერცხუჯრედში აღდგენის პროცესებს, რომლებიც აღადგენს ამ დაზიანებებს, მაგრამ ბავშვში მუტაციებისა და თანდაყოლილი დაავადებების რისკი იზრდება. სპონტანური აბორტის სიხშირე კორელაციაშია სპერმის დნმ-ის დაზიანების ხარისხთან. ეს დაკავშირებულია თანდაყოლილი დაავადებებისა და განვითარების დარღვევების სიხშირესთან ICSI-ის მქონე ბავშვებში.
დნმ-ის კომეტის მეთოდი გამოიყენება არა მხოლოდ დნმ-ის მდგომარეობის შესაფასებლად, არამედ უჯრედებში აღდგენითი პროცესების შესასწავლად. ამ შემთხვევაში, შესწავლილი უჯრედები ნადგურდება და შედეგად მიღებული ჰომოგენატი მუშავდება დნმ-ში, რომელშიც პირველად შეჰყავთ გარკვეული ტიპის დაზიანება და ნარევს ემატება აღდგენისთვის აუცილებელი ნუკლეოტიდები და ATP. ჰომოგენატის უნარი აღადგინოს გარკვეული დაზიანებები, გამოიყენება უჯრედებში სარემონტო სისტემების აქტივობის შესაფასებლად. დნმ-ში შეტანილი დაზიანების ტიპი დამოკიდებულია იმაზე, თუ რომელი აღდგენის მექანიზმია შესწავლილი. მაგალითად, ბაზის ამოკვეთის შეკეთების შესაფასებლად გამოიყენება 8-ოქსოგუანინის შემცველი შუქით დაზიანებული დნმ, ხოლო ნუკლეოტიდის ამოკვეთის შეკეთება გამოიყენება ულტრაიისფერი შუქით დასხივებული პირიმიდინის დიმერების შემცველი დნმ. ერთჯაჭვიანი რღვევები წარმოიქმნება წყალბადის ზეჟანგით დამუშავებით, რენტგენის ან გამა სხივებით დასხივებით, ხოლო დნმ-ის ალკილაცია ხორციელდება მეთილის მეთანესულფონატით დამუშავებით. ნუკლეოტიდის ამოკვეთის შეკეთების შესასწავლად გამოიყენება დნმ-ის რღვევების დაგროვების შეფასება ამ პროცესში ჩართული პოლიმერაზების ბლოკირებისას აფიდოკოლინის ან ციტოზინის არაბინოზიდის გამოყენებით ჰიდროქსიურეასთან ერთად.
შეკეთებასთან დაკავშირებული გენების გამოხატვის ანალიზი ყოველთვის არ შეიძლება იყოს უჯრედებში დნმ-ის მდგომარეობის ობიექტური მაჩვენებელი, ამიტომ დნმ-ის კომეტის მეთოდი საშუალებას იძლევა მიიღოთ ღირებული დამატებითი ინფორმაცია. სარემონტო სისტემების გაზრდილი აქტივობა მიუთითებს არა მხოლოდ იმაზე, რომ უჯრედები უფრო მდგრადია გენომის დაზიანების მიმართ, არამედ იმაზეც, რომ ისინი ექვემდებარებიან გენოტოქსიურ აგენტს, რის შედეგადაც გააქტიურებულია შეკეთებაში მონაწილე ცილების სინთეზი. Q10-ის, C ვიტამინის დამატება ნელ ხსნად კაფსულებში, ზრდის ბაზის ამოკვეთის აღდგენის აქტივობას. მსგავსი ეფექტი შეინიშნება, თუ ნარკოტიკების ნაცვლად ანტიოქსიდანტებით მდიდარ ხილს და ბოსტნეულს იყენებთ. ეს ამცირებს ნუკლეოტიდის ამოკვეთის აღდგენის სისტემის აქტივობას, რადგან ის აღარ არის საჭირო.
მიკრობირთვული ტესტი კანცეროგენობის პირდაპირი მაჩვენებელია და ICH გაიდლაინები გვირჩევენ მის გამოყენებას კომეტა დნმ-თან ერთად. დნმ-ის კომეტის ტექნიკა შეიძლება გაერთიანდეს ფლუორესცენციულ FISH ჰიბრიდიზაციასთან, რათა დადგინდეს, გავლენას ახდენს თუ არა ცვლილებები გენომის კონკრეტულ რეგიონებზე. დნმ-ის კომეტის პროცედურის შედეგად მიღებული დიდი რაოდენობით დნმ-ის ბილიკების ანალიზისთვის. რეკომენდებულია ავტომატური გადაწყვეტილებების გამოყენება. ეს შეამცირებს შეფასების სუბიექტურობას და უფრო ზუსტად შეაფასებს ჩამოყალიბებული ბუმბულის ზომასა და ფორმას, რაც განსაკუთრებით მნიშვნელოვანია თითოეულ პრეპარატში დიდი რაოდენობით ქლიავის შესახებ მონაცემების შეგროვების აუცილებლობის გათვალისწინებით. დნმ კომეტა შეიძლება გამოვიყენოთ, როგორც მეთოდი კლინიკური დიაგნოსტიკისთვის და კვლევის მიზნებისთვის - კონკრეტული ნაერთის გენოტოქსიკურობის შესაფასებლად.
- Kang SH, Kwon JY, Lee JK, Seo YR. უახლესი მიღწევები in vivo გენოტოქსიურობის ტესტირებაში: კანცეროგენული პოტენციალის პროგნოზირება კომეტისა და მიკრონუკლეუსის ანალიზის გამოყენებით ცხოველურ მოდელებში / J Cancer Prev. - 2013. V.18, N.4. - გვ 277-88.
- Rojas E, Lorenzo Y, Haug K, Nicolaissen B, Valverde M. ეპითელური უჯრედები, როგორც ადამიანის ალტერნატიული ბიომატრიკები კომეტის ანალიზისთვის / წინა გენე. - 2014. V5. N. 386.
- Azqueta A, Slyskova J, Langie SA, O'Neill Gaivão I, Collins A. Comet assay დნმ-ის შეკეთების გასაზომად: მიდგომა და აპლიკაციები / Front Genet - 2014. - V.5, N.288.
- Aitken RJ, Bronson R, Smith TB, De Iuliis GN. ადამიანის სპერმატოზოიდების დნმ-ის დაზიანების წყარო და მნიშვნელობა; კომენტარი დიაგნოსტიკური სტრატეგიებისა და ჩალის ადამიანის ცდომილების შესახებ / Mol Hum Reprod. - 2013. - V.19. N.8. - გვ 475-85.
ლიმფოციტების დნმ-ზე გამა სხივების გავლენის შეფასება დნმ-ის კომეტის მეთოდით. მიკროფოტოები (A) და დამუშავებული სურათები (B).
Wang Y, Xu C, Du LQ, Cao J, Liu JX, Su X, Zhao H, Fan F-Y, Wang B, Katsube T, Fan SJ, Liu Q. კომეტის ანალიზის შეფასება დნმ-ის დოზა-პასუხის კავშირის შესაფასებლად მაიონიზებელი გამოსხივებით გამოწვეული დაზიანება / ინტ. ჯ.მოლი. მეცნიერ. - 2013. - V.14. N.11. - გვ.22449-22461.
წყალბადის ზეჟანგის მოქმედება მოლუსკის სპერმატოზოიდების დნმ-ზეChoromytilus გუნდი
Lafarga-De la Cruz F., Valenzuela-Bustamante M., Del Río-Portilla M., Gallardo-Escárate C. გენომიური მთლიანობის შეფასება Choromytilus chorus-ის სპერმაში (მოლინა, 1782) კომეტის ანალიზით / გაიანა. - 2008. - V.72. N.1. - გვ.36-44.
ცხოველები და მათი შთამომავლობა მუდმივად ივსება და მატულობს მაწანწალა ძაღლებისა და კატების რაოდენობას, ამიტომ მათი გამრავლების კონტროლი მაწანწალაების რაოდენობის შემცირების ერთ-ერთი აუცილებელი პირობაა, ამიტომ აუცილებელია შინაური ცხოველების შენახვის წესების შემუშავება;
მაწანწალა ცხოველების დაჭერის, ტრანსპორტირების, სტერილიზაციის, მოვლა-პატრონობის, აღრიცხვისა და აღრიცხვის წესების ან ინსტრუქციების შემუშავება;
ძაღლების დაჭერისას საჭიროა ბიოლოგიური ობიექტების მოძრაობის შეზღუდვისა და ცხოველების „მფრინავი შპრიცის“ გამოყენებით არაინჰალაციის ანესთეზიის გამოყენებით იმობილიზაციის თანამედროვე საშუალებების გამოყენება;
მაწანწალა ძაღლებისთვის თავშესაფრების შექმნა და მათი სტერილიზაციის საავადმყოფოები;
სიცოცხლისუნარიანი ცხოველების ევთანაზია ტანჯვის შესაჩერებლად უნდა განახორციელოს მხოლოდ მომუშავე ვეტერინარმა
UDC 577.323:576.385 (591+581)
ორგანიზაციებში, რომლებსაც აქვთ სამედიცინო და პროფილაქტიკური საქმიანობის ლიცენზია.
შექმენით სპეციალური კრემატორიუმი მკვდარი მაწანწალა და შინაური ცხოველების მოსაშორებლად, რადგან ცხოველთა ნებისმიერი დაკრძალვა კანონით აკრძალულია. სანიტარული სტანდარტები, ასეთი სასაფლაოები საფრთხეს უქმნის ინფექციური დაავადებების გავრცელების ადგილად იქცეს.
ლიტერატურა
1. კოლი გ. ხერხემლიანთა პოპულაციების ანალიზი. - მ.: მირი, 1979. - 362გვ.
2. ვერეშჩაგინი A.O., Poyarkov A.D., Goryachev K.S. ქალაქში მაწანწალა ძაღლების რაოდენობის შეფასების მეთოდები // პროკ. თერიოლოგიური საზოგადოების VI ყრილობის მოხსენებები. - მ., 1999. - 47გვ.
3. ჩელინცევი ნ.გ. ცხოველთა აღრიცხვის მათემატიკური საფუძვლები. - მ., 2000. - 431გვ.
მიღებულია რედაქტორის მიერ 22.03.2014წ
„დნმ კომეტის“ მეთოდის გამოყენება გარემო ფაქტორებით გამოწვეული მცენარეების, ცხოველებისა და ადამიანების უჯრედებში დნმ-ის დაზიანების ხარისხის გამოსავლენად და შესაფასებლად (მიმოხილვა)
ე.ვ. ფილიპოვი
გარემოს არახელსაყრელი ფაქტორების ზემოქმედებას ნებისმიერ ბიოლოგიურ სისტემაზე (უჯრედოვანი ორგანიზმები, მცენარეები, ცხოველები, ადამიანები) თან ახლავს დნმ-ის დაზიანების დაგროვება და სარემონტო სისტემების აქტივობის ცვლილებები, რამაც შეიძლება გამოიწვიოს მუტაციები და პათოლოგიური ცვლილებები უჯრედსა და უჯრედში. მთელი ორგანიზმი. მიმოხილვამ შეაფასა "დნმ კომეტის" მეთოდის ეფექტურობა სხვადასხვა გარემო ფაქტორებით გამოწვეული დნმ-ის დაზიანების აღმოსაჩენად: რადიაცია, არაიონებელი გამოსხივება, ქიმიური, გონებრივი (ადამიანებისთვის). აღწერილია მეთოდის მეთოდოლოგიური და მეთოდოლოგიური საფუძვლები. მეთოდს აქვს სენსიტიურობა, რომელიც აუცილებელია ცალკეული უჯრედის დონეზე დნმ-ის დაზიანების გამოსავლენად და შეიძლება გამოყენებულ იქნას გენომის ინტეგრალური მთლიანობის შესაფასებლად. „დნმ კომეტის“ მეთოდის გამოყენების სფეროები: ნებისმიერი ბიოლოგიური სისტემის „სიცოცხლის ხარისხის“ შეფასება ჰაბიტატის გარკვეულ გარემო პირობებში; ბიომონიტორინგი, მედიცინა, კერძოდ ონკოლოგია, ტოქსიკოლოგია, ფარმაკოლოგია, ეპიდემიოლოგია და მრავალი სხვა.
საკვანძო სიტყვები: დნმ-ის დაზიანება, მუტაციები, შეკეთება, აპოპტოზი, გენოტოქსიკურობა, ინფექციური დაავადებები, ონკოლოგია.
გარემოს არახელსაყრელი ფაქტორების ზემოქმედებას ნებისმიერ ბიოლოგიურ სისტემაზე (ერთუჯრედული, მცენარეები, ცხოველები, ადამიანები) თან ახლავს უჯრედების დნმ-ში დაზიანების დაგროვება და რეპარაციული სისტემების აქტივობის ცვლილება, რამაც შეიძლება გამოიწვიოს უჯრედებში მუტაციები და პათოლოგიური ცვლილებები და ინტეგრირებული. ორგანიზმი . მიმოხილვაში წარმოდგენილია „დნმ კომეტების“ მეთოდის ეფექტურობის შეფასება გარემოს სხვადასხვა ფაქტორებით გამოწვეული დნმ-ის დაზიანების გამოვლენისთვის - რადიოაქტიური, არა მაიონებელი გამოსხივება, ქიმიური, გონებრივი (ადამიანისთვის). აღწერილია მეთოდის მეთოდოლოგიური და მეთოდური საფუძვლები. მეთოდს აქვს სენსიტიურობა, რომელიც აუცილებელია უჯრედის დონეზე დნმ-ის დაზიანების აღრიცხვისთვის და შეიძლება გამოყენებულ იქნას ინტეგრირებული მთლიანობის შესაფასებლად.
ფილიპოვი ედუარდ ვასილიევიჩი - ბიოლოგიურ მეცნიერებათა კანდიდატი, უფროსი მკვლევარი IBPK SB RAS, [ელფოსტა დაცულია].
გენომის სიმრავლე. „დნმ კომეტების“ მეთოდის ფარგლები: ნებისმიერი ბიოლოგიური სისტემის „სიცოცხლის ხარისხის“ შეფასება ჰაბიტატის ნებისმიერ ეკოლოგიურ პირობებში; ბიომონიტორინგი, მედიცინა, კერძოდ ონკოლოგია, ტოქსიკოლოგია, ფარმაკოლოგია, ეპიდემიოლოგია და ა.შ.
საკვანძო სიტყვები: დნმ დაზიანება, მუტაცია, რეპარაცია, აპოპტოზი, გენეტიკური ტოქსიკურობა, ინფექციური დაავადებები, ონკოლოგია.
ახლა უკვე ცნობილია, რომ როდესაც ექვემდებარება სხვადასხვა ბუნების გარემო ფაქტორებს (ქიმიური, ფიზიკური და ა. უარყოფითი გავლენა. ეს შეიძლება მოხდეს როგორც პირდაპირი მოქმედების გამო, მაგალითად, დნმ-ის მოლეკულების დაზიანების შემთხვევაში მაიონებელი გამოსხივებით "სამიზნე" პრინციპის მიხედვით, ასევე ირიბად, უჯრედში წარმოქმნილი თავისუფალი რადიკალების და რეაქტიული ჟანგბადის სახეობების გამო. დნმ-ის მოლეკულებში წარმოქმნილი ზიანის უმეტესი ნაწილი აღდგება სარემონტო სისტემებით, მაგრამ თუ უარყოფითი წნევა მაღალია, მაშინ დაზიანება გროვდება და ამან შეიძლება გამოიწვიოს ფიქსირებული მუტაციები, ონკოგენეზი ან უჯრედის სიკვდილი. დნმ-ის დაზიანების ფორმირება მნიშვნელოვანი ინიციატორი მოვლენაა ორგანიზმში პათოლოგიური პროცესების განვითარებაში. ამ მხრივ განსაკუთრებით აქტუალურია დნმ-ის სტრუქტურის დაზიანების გამოვლენა ადრეულ ეტაპებზე, როდესაც ორგანიზმში პათოლოგიური პროცესები ჯერ არ დაწყებულა და, შესაბამისად, ფიზიოლოგიურ დონეზე დიაგნოსტირება შეუძლებელია. დნმ-ის სტრუქტურის შესასწავლად მეცნიერებაში გამოყენებული მეთოდების მრავალფეროვნების მიუხედავად, ყველა მათგანს არ აქვს საკმარისი მგრძნობელობა და სპეციფიკა დნმ-ის დაზიანების მონიტორინგისთვის, რაც საშუალებას იძლევა შეაფასოს ფაქტორების პათოგენეტიკური ეფექტი in vivo.
შედარებით ცოტა ხნის წინ, შემუშავდა დნმ-ის დაზიანების ანალიზის მეთოდი, რომელიც გამოიყენება როგორც in vitro, ასევე in vivo. მას ეწოდა "დნმ-კომეტის ანალიზი" ცალკეული უჯრედებიდან დნმ-ის გელის ელექტროფორეზის მეთოდს, რომელიც პირველად აღწერეს ოსტლინგმა და იოჰანსონმა 1984 წელს. დნმ კომეტის მეთოდის გაუმჯობესებამ და მოდიფიკაციამ მნიშვნელოვნად გაზარდა მისი მგრძნობელობა და გააფართოვა მისი გამოყენების სფერო.
ნაშრომში განხორციელდა მეთოდის გამოყენების საკმაოდ ფართო მიმოხილვა სამედიცინო მეცნიერების სხვადასხვა დარგში. ამჟამად მეთოდი ფართოდ გამოიყენება ქიმიკატების გენოტოქსიკურობის, დნმ-ის აღდგენისა და აპოპტოზის სისტემების აქტივობის კვლევებში, პრენატალურ დიაგნოზზე, კიბოსადმი მიდრეკილებაზე და თერაპიის ეფექტურობის მონიტორინგში.
კიბოს, კატარაქტის და ა.შ. "დნმ კომეტის" მეთოდი ხდება ბიომონიტორინგის პროგრამების განუყოფელი ნაწილი - აფასებს ორგანიზმზე ზემოქმედებას დიეტაზე, გარემო ფაქტორებზე, მათ შორის მაიონებელი გამოსხივება და "ელექტრომაგნიტური სმოგი", მეტაბოლიზმისა და ფიზიოლოგიური მდგომარეობის ცვლილებები, სხეულის დაბერება, დაგროვება და. დნმ-ის დაზიანების შეკეთება; კვლევა ეკოლოგიაში. "დნმ კომეტის" მეთოდის გამოყენება შესაძლებელს ხდის შევისწავლოთ დნმ-ის დაზიანების დაგროვება და მისი აღდგენითი სისტემების აქტივობა თითქმის ნებისმიერ ევკარიოტულ უჯრედში, მაგალითად, ციანობაქტერიების, მცენარეების, ცხოველების და ადამიანების უჯრედებში.
მეთოდი ეფუძნება ერთჯერადი ლიზირებული უჯრედების გელის ელექტროფორეზს. ამ შემთხვევაში, დნმ-ის მოლეკულები ნაწილდება გელის ფორებში ელექტრული ველის გავლენით, ხოლო დნმ-ის ტრასების ვიზუალიზაცია ხდება ფლუორესცენტური საღებავით შეღებვით, რის შემდეგაც ნიმუშები მიკროსკოპულად იკვლევენ. დნმ-ის რღვევების არსებობისას ირღვევა ქრომატინის სტრუქტურული ორგანიზაცია და იკარგება დნმ-ის სუპერკოპირება, რაც იწვევს მის მოდუნებას და წარმოიქმნება დნმ-ის ფრაგმენტები. ელექტრულ ველში მოდუნებული მარყუჟები და დნმ-ის ფრაგმენტები იწელება ანოდისკენ, რაც დაკვირვებულ ობიექტებს აძლევს "კომეტების" იერს (აქედან გამომდინარეობს სახელწოდება "comet assay", რომელიც ხშირად გამოიყენება). "კომეტების" ანალიზი ხდება ან ვიზუალური დაკვირვებით და მათი დიფერენცირებით დნმ-ის დაზიანების ხარისხის მიხედვით, ან კომპიუტერული გამოსახულების დამუშავების პროგრამული უზრუნველყოფის გამოყენებით.
ამჟამად, ლაბორატორიების უმეტესობამ, რომლებმაც დანერგეს ეს მეთოდოლოგიური მიდგომა კვლევაში, შეიმუშავეს პროტოკოლის მრავალი ვარიაცია, კერძოდ, უჯრედების ლიზისის, დენატურაციის, ელექტროფორეზის და დნმ-ის შეღებვის ხანგრძლივობისა და პირობების თვალსაზრისით. ნაშრომებში საკმაოდ სრულად არის აღწერილი მეთოდის ვარიაციების გამოყენების თავისებურებების მეთოდოლოგიური ასპექტები. მეთოდის ზოგადი სქემა მოიცავს შესწავლილი უჯრედების სუსპენზიის მომზადებას, გელის სლაიდების მომზადებას აგაროზის სუბსტრატით, უჯრედების მოთავსებას აგაროზის გელში, გელის სლაიდებზე გამოყენებას, ლიზისს, ტუტე დენატურაციას მეთოდის ტუტე ვერსიაში. ელექტროფორეზი, ფიქსაცია/ნეიტრალიზაცია, შეღებვა და მიკროსკოპული ანალიზი (სურ. 1).
ბრინჯი. 1. „დნმ კომეტის“ მეთოდის გამოყენების სქემა
უჯრედული სუსპენზიების მომზადება „დნმ კომეტის“ მეთოდის ერთ-ერთი მთავარი ეტაპია. ამ შემთხვევაში იზოლირებული უჯრედების მისაღებად გამოიყენება მთელი რიგი მეთოდები: ფერმენტული დამუშავება პროტეაზებით (ტრიფსინი, კოლაგენაზა), ქსოვილების მექანიკური დაშლა, მემბრანებზე გამოყოფა ან ჰომოგენიზაცია.
ცხოველურ ორგანიზმებზე გარემო ფაქტორების გენოტოქსიურობის შეფასებისას "დნმ კომეტის" მეთოდით in vitro გამოიყენება პირველადი და უწყვეტი ადამიანის უჯრედული კულტურები, რომლებიც ტრადიციულად გამოიყენება გენოტოქსიკოლოგიურ კვლევებში (პერიფერიული სისხლის ლიმფოციტები და ადამიანის ფიბრობლასტები, HeLa საშვილოსნოს ყელის კარცინომა, A-549 ფილტვის კარცინომა , ხორხის კარცინომა Hep2 და ა.შ.) . ტომას გიხნერი და სხვ. მცენარეებზე მძიმე მეტალების ზემოქმედების შესწავლისას, ნერგები ინკუბირებული იქნა კადმიუმის მარილებით გარემოში, შემდეგ ნერგების ფესვებისა და ფოთლების წვერების უჯრედები გამოეყო და გადაიტანეს ბუფერულ ხსნარში, იმობილიზაცია მოახდინა სლაიდებში, გაასუფთავეს და შეისწავლეს. "დნმ კომეტის" მეთოდის ტუტე და ნეიტრალურ ვერსიაში. კვლევის ამ ეტაპზე სხვადასხვა ვარიაციები შეზღუდული არ არის და დამოკიდებულია მხოლოდ ამოცანების ჩამოყალიბებაზე და კვლევის მიზანზე.
მიკროსლაიდების მომზადება და ლიზისი.
გელის სლაიდები არის ჭიქები, რომლებიც დაფარულია აგაროზის საყრდენით. ნორმალური წერტილიდნობის. ტრადიციულად, ზედაპირის 1/4-ზე წარწერების დასაწერად გამოიყენება მინის სლაიდები ყინვაგამძლე ზოლით, რომლებიც გამოიყენება მიკროსკოპში. შესწავლილი უჯრედები იმობილირდება დაბალ დნობის აგაროზაში და გამოიყენება მინაზე. ლიზისის პროცესის დროს, NaCl-ისა და სარეცხი საშუალებების მაღალი კონცენტრაციის გავლენით, ხდება უჯრედული სტრუქტურების დისოციაცია; დეპროტეინირებული დნმ ავსებს აგაროზაში უჯრედის მიერ წარმოქმნილ ღრუს.
ტუტე დენატურაცია და ელექტროფორეზი. მეთოდის ნეიტრალურ ვერსიაში, ლიზისის შემდეგ, მიკროპრეპარატები ექვემდებარება ელექტროფორეზს ნეიტრალურ ბუფერში, რომლის დროსაც დნმ ორჯაჭვიანი დნმ-ის ძაფებისა და მარყუჟების სახით მიგრირებს აგაროზის ფორებში ანოდში, ქმნიან ელექტროფორეზულ კუდს. . მეთოდის ტუტე ვერსიაში დამატებითი ეტაპიტუტე დენატურაცია და თავად ელექტროფორეზი ტარდება ტუტე გარემოში (pH>13). ტუტე დენატურაციის დროს დნმ გარდაიქმნება ერთჯაჭვიან ფორმად, ხოლო ტუტე-ლაბილი ადგილები რეალიზდება ერთჯაჭვიან რღვევებად. იმავე ბუფერში ელექტროფორეზის დროს, მიღებული ერთჯაჭვიანი დნმ და დნმ-ის ფრაგმენტები მიგრირდება ანოდში, ქმნიან კომეტის კუდს, რომელშიც ნეიტრალიზაციის/ფიქსაციის შემდეგ ისინი შემთხვევით გადაიქცევა ორჯაჭვიან დნმ-ში.
ამრიგად, "დნმ კომეტის" მეთოდის ტუტე ვერსიის გამოყენება საშუალებას გაძლევთ შეაფასოთ ძირითადად ერთჯაჭვიანი რღვევების და ტუტე-ლაბილი ადგილების გამოსავლიანობა, რადგან ამ პროტოკოლის გამოყენებისას ორჯაჭვიანი წყვეტები შეადგენს 5%-ზე ნაკლებს. დნმ-ის დაზიანების მთლიანი გამოსავალი. "დნმ კომეტის" მეთოდი, რომელიც განხორციელდა ნეიტრალურ გარემო პირობებში, აღმოაჩენს ძირითადად დნმ-ის ორჯაჭვიან რღვევებს.
მიკროსკოპია და ანალიზი. სლაიდების ნეიტრალიზაციის/ფიქსაციისა და შეღებვის შემდეგ მიკროპრეპარატების ანალიზი ხდება ეპიფლუორესცენციულ მიკროსკოპზე საღებავის შესაბამისი ფილტრებით უჯრედის ტიპის მიხედვით 200-400-ჯერ გადიდებით. დნმ-ის კომეტის ანალიზი შეიძლება განხორციელდეს ვიზუალურად ან აპარატურული და პროგრამული კომპლექსის გამოყენებით. ვიზუალური მეთოდის გამოყენებით, დნმ-ის კომეტები დაყოფილია ხუთ პირობით ტიპად (ნახ. 2, A), თითოეულის შესაბამისი რიცხვითი მნიშვნელობით 0-დან 4-მდე.
დნმ-ის დაზიანების ხარისხი გამოიხატება დნმ-ის კომეტის ინდექსით (DCI), რომელიც განისაზღვრება ფორმულით:
CC4SP - -~-TJDi1U1
No. Ш» V*- AN-™ tsAb- 1»
ბ
ბრინჯი. 2. დნმ-ის კომეტები დნმ-ის სხვადასხვა ხარისხის დაზიანების მქონე (A) და მათი ციფრული გამოსახულების ანალიზი CASP პროგრამულ გარემოში (B). მითითებულია დნმ-ის თითოეული ტიპის კომეტის რიცხვითი მნიშვნელობები, რომლებიც გამოიყენება მიკროპრეპარატების ვიზუალურ ანალიზში.
IDK = (0xn0 + 1xnj + 2xn2 + 3xn3 + 4xn4) / I,
სადაც n0-n4 არის თითოეული ტიპის დნმ-ის კომეტების რაოდენობა, I არის გაანალიზებული დნმ-ის კომეტების ჯამი.
პროგრამული უზრუნველყოფისა და აპარატურის კომპლექსი შედგება უაღრესად მგრძნობიარე CCD კამერისგან, მიკროსკოპთან და სპეციალიზირებულ პროგრამულ უზრუნველყოფასთან ერთად, რომელიც საშუალებას იძლევა ციფრული აღრიცხვა და დამუშავება დნმ-ის კომეტის პარამეტრების, რომლებიც ახასიათებს დნმ-ის სტრუქტურის მთლიანობას: დნმ კომეტების სიგრძე, კუდის სიგრძე, თავის დიამეტრი. , დნმ-ის პროცენტი თავში ან კუდში (% დნმ) და ა.შ. (ნახ. 2, B). დნმ-ის დაზიანების ყველაზე ხშირად გამოყენებული მაჩვენებელია კუდის სიგრძე, დნმ-ის პროცენტი კუდში ან მათი პროდუქტი - ე.წ. "კუდის მომენტი". არსებობს მაღალი ხარისხის კორელაცია დნმ კომეტების ანალიზის ვიზუალური და აპარატურული და პროგრამული მეთოდების შედეგებს შორის.
უჯრედების სიკვდილის შეფასება. დნმ-ის კომეტების მიკროპრეპარატების დროს ხშირად იდენტიფიცირებულია ატიპიური დნმ-ის კომეტები არარსებული ან პრაქტიკულად არმყოფი თავით და ფართო დიფუზური კუდით, რომელსაც ეწოდება მოჩვენების უჯრედები ან ზღარბი. ისინი გამოყოფილია ცალკე კატეგორიად და გამორიცხულია ზოგადი ანალიზიდან, რადგან
ვინაიდან ასეთი კომეტების კუდის დნმ წარმოდგენილია მოკლე დისკრეტული ფრაგმენტების სახით (ნახ. 3, A).
ვარაუდობდნენ, რომ დნმ-ის ასეთ კომეტებს შეუძლიათ შექმნან აპოპტოზური უჯრედები, რომლებიც იმყოფებიან ქრომატინის ფრაგმენტაციის ეტაპზე, რაც ექსპერიმენტულად დადასტურდა.
მსგავსი მორფოლოგიის დნმ-ის კომეტები გამოვლენილია ციტოტოქსიური აგენტების, როგორიცაა წყალბადის ზეჟანგით, უჯრედების ანალიზისას (ნახ. 3, B). მათი წარმოშობის მექანიზმი გაურკვეველია, ვარაუდობენ, რომ დნმ-ის ფრაგმენტაცია ხდება „ოქსიდაციური სტრესის“ და რეაქტიული ჟანგბადის სახეობების მიერ დნმ-ის მოლეკულის შეტევის გამო. ასეთი ატიპიური დნმ-ის კომეტებისა და დნმ-ის კომეტების ბიმოდალური განაწილება დნმ-ის დაბალი დონის დაზიანებით მიუთითებს ციტოტოქსიურ ეფექტზე. ნეკროზული უჯრედების დნმ კომეტებს განსხვავებული მორფოლოგია აქვთ. ეს არის ფართო, ხშირად არარეგულარული ფორმის დნმ-ის კომეტები ძნელად დიფერენცირებადი თავითა და კუდით (ნახ. 3, B).
ამრიგად, „დნმ-ის კომეტის“ მეთოდი საშუალებას იძლევა განისაზღვროს, დნმ-ის დაზიანებასთან ერთად, შესწავლილი აგენტების აპოპტოგენური და ციტოტოქსიური აქტივობა. მეთოდის შესაძლებლობები არ შემოიფარგლება უწყვეტობის იდენტიფიცირებით
ბრინჯი. 3. აპოპტოზური (A, მითითებულია სიმბოლო *), ციტოტოქსიური (B, მითითებული სიმბოლოთი *) და ნეკროზული (C, მითითებულია ისრით) უჯრედების დნმ კომეტები. შეღებვა SYBR მწვანე I, გადიდება x200
დნმ, როგორც მათი დაზიანების განუყოფელი მაჩვენებელი. შესაბამისი მოდიფიკაციით, ამ მეთოდს შეუძლია კონკრეტულად შეაფასოს დნმ-ის სხვადასხვა სახის დაზიანება, რაც მნიშვნელოვნად აფართოებს მის გამოყენებადობას.
შეცვლილი დნმ-ის ბაზების შეფასება. "დნმ კომეტის" მეთოდის მოდიფიკაციას დნმ-ში დაზიანებული ბაზების შესაფასებლად ეწოდება Comet FLARE (ფრაგმენტის სიგრძის ანალიზი აღდგენითი ფერმენტების გამოყენებით). მისი არსი მდგომარეობს მიკროპრეპარატებზე ლიზირებული უჯრედების დნმ-ის დამუშავებაში სპეციფიური აღდგენითი ფერმენტებით, რომლებიც ქმნიან დნმ-ის რღვევებს დაზიანებული ბაზების ადგილებზე.
ფერმენტ ფორმამიდოპირიმიდინის დნმ გლიკოზილაზას (Fpg) გამოყენებით ფასდება დაჟანგული გუანინის დონე (8-oxoGua, FapyGua), ფორმამიდოპირიმიდინები - ღია რგოლი პირიმიდინის ფუძეები, ასევე ალკილირებული ბაზების რაოდენობა. გლიკო-ს გამოყენება
hOGG1 სილაზა 8-oxoG-ის სპეციფიკური გამოვლენის საშუალებას იძლევა. შემუშავებულია პროტოკოლები დნმ-ში პირიმიდინის დიმერების შეფასებისთვის პირიმიდინ დიმერული გლიკოზილაზების (T4-PDG ან cv-PDG), 6,4-ფოტოპროდუქტების გამოყენებით S. pobe UVDE და არასწორად დაწყვილებული ურაცილის გამოყენებით ურაცილის დნმ გლიკოზილაზას (UDG) გამოყენებით. .
დნმ-დნმ-ისა და დნმ-პროტეინის ჯვარედინი კავშირების შეფასება. დნმ-პროტეინის ჯვარედინი კავშირების არსებობის დასადგენად, დნმ-ლიზირებული უჯრედები მკურნალობენ პროტეაზა K-ით. ეს იწვევს გელში დნმ-ის ელექტროფორეზული მობილურობის ზრდას დნმ-სა და ჰისტონურ პროტეინებს შორის ჯვარედინი კავშირების განადგურების გამო. დეგრადირებულია ლიზისის პროცესში. ფერმენტული დამუშავებით და მის გარეშე ინდიკატორების თანაფარდობიდან გამომდინარე, განისაზღვრება დნმ-ში ჯვარედინი კავშირების პროცენტული მაჩვენებელი.
დნმ-დნმ ჯვარედინი კავშირების შესაფასებლად, ლიზისის შემდეგ მიკროპრეპარატები ექვემდებარება რადიაციას ან წყალბადის ზეჟანგის მაღალ კონცენტრაციას, რაც ზრდის დნმ-ის საწყის დაზიანებას. ამ შემთხვევაში, დნმ-ის შემცველი დნმ-დნმ-ის ჯვარედინი კავშირები მიგრირდება ნაკლებად ელექტროფორეზის დროს. მკურნალობის შემდეგ კონტროლისა და ტესტის დნმ-ის მობილურობის ცვლილებების თანაფარდობიდან გამომდინარე, გამოითვლება დნმ-დნმ ჯვარედინი ბმულების პროცენტული მაჩვენებელი.
დნმ-ის მეთილაციის შეფასება. დნმ-ის მეთილაციის დონის შესაფასებლად "დნმ კომეტის" მეთოდით გამოიყენება რესტრიქციული ფერმენტი Hpa11, რომელიც მგრძნობიარეა შიდა ციტოზინის მეთილაციის მიმართ CCGG თანმიმდევრობაში და რესტრიქციული ფერმენტი MspI, რომელიც არ არის მგრძნობიარე ამ ტიპის მეთილაციის მიმართ. დნმ CpG კუნძულების მეთილაციის პროცენტი განისაზღვრება ფორმულით:
100 - [(Hra11^р1) 100],
სადაც HpaI/MspI არის დნმ-ის პროცენტი კუდში ლიზირებული უჯრედების დნმ-ის შესაბამისი შემაკავებელი ფერმენტით დამუშავების შემდეგ.
ექსპერიმენტები აჩვენებს შედეგების მაღალ მსგავსებას მეთილაციის შეფასების ტრადიციული მეთოდით მიღებულ მონაცემებთან ეტიკეტირებული ციტოზინის ჩართვით. ციტირებული ნაშრომი გამოიყენა მეთოდის ტუტე ვერსია. ექსპერიმენტებმა აჩვენა, რომ ნეიტრალური ელექტროფორეზის გამოყენება "დნმ კომეტის" მეთოდის ამ მოდიფიკაციისთვის უფრო მისაღებია, რადგან შეზღუდვის ფერმენტები მხოლოდ ორმაგ რღვევებს ახორციელებენ დნმ-ში.
"დნმ კომეტის" მეთოდის გამოყენება ქიმიკატების გენოტოქსიური ეფექტის შესწავლაში. "დნმ კომეტის" მეთოდის შესაძლებლობები, მისი დადებითი და უარყოფითი მხარეები ნათლად არის ნაჩვენები 208 ქიმიური ნაერთის გენოტოქსიურობის შესწავლაში, უაღრესად
შერჩეული კანცეროგენული ნივთიერებების სხვადასხვა ჯგუფიდან კიბოს კვლევის საერთაშორისო სააგენტოსა და აშშ-ის ტოქსიკოლოგიის ეროვნული პროგრამის კლასიფიკაციის მიხედვით. ტესტირება ჩატარდა თაგვებზე (8 ორგანო) და აჩვენა ამ მეთოდის უპირატესობა, რომელიც დაკავშირებულია ნებისმიერ ორგანოში დნმ-ის დაზიანების გამოვლენის უნართან, მიუხედავად მასში მიტოზური აქტივობის ხარისხისა. ტესტის შედეგებმა აჩვენა, რომ მეთოდი ყველაზე ეფექტურია დნმ-ის მოლეკულების ფრაგმენტაციის განსაზღვრაში, რომელიც წარმოიქმნება როგორც ქიმიური ნივთიერებებით გამოწვეული ერთჯაჭვიანი რღვევის შედეგად, ასევე ტუტე-ლაბილი ადგილებიდან, რომლებიც წარმოიქმნება ფუძეების ალკილირებისა და დნმ-ის დანამატების წარმოქმნის შედეგად. დნმ კომეტის მეთოდის შედარება ეიმსის ტესტთან, რომელიც არის ზოგადად მიღებული მეთოდი გენოტოქსიური ნივთიერებების სკრინინგისთვის, გამოავლინა მაღალი ხარისხის კორელაცია კანცეროგენული და არაკანცეროგენული ნაერთების ტესტირებისას მიღებულ შედეგებს შორის. ნივთიერებების კანცეროგენურობის (რომელმაც უარყოფითი შედეგი აჩვენა ეიმსის ტესტში) „დნმ კომეტის“ მეთოდით ჩატარებულმა კვლევებმა აჩვენა, რომ მათი ნახევარი გენოტოქსიკურია. ეს უკანასკნელი მიუთითებს ორივე მეთოდის შეზღუდვებზე, რაც კიდევ უფრო მიუთითებს იმაზე, რომ მეთოდები, რომლებიც დნმ-ის დაზიანებას აღმოაჩენენ, ცუდად არის შესაფერისი არაგენოტოქსიკური კანცეროგენების იდენტიფიცირებისთვის. ცხადია, არ არსებობს ერთი მეთოდი, რომელსაც შეუძლია გამოავლინოს ყველა გენოტოქსიური ეფექტი. ამიტომ, ჩვეულებრივი პრაქტიკაა ინ ვივო და ინ ვიტრო ტესტების ბატარეის გამოყენება.
დასკვნა
დნმ-ის კომეტის მეთოდს აქვს მრავალი მნიშვნელოვანი უპირატესობა დნმ-ის დაზიანების შეფასების სხვა მეთოდებთან შედარებით. ეს არის მაღალი მგრძნობელობა, ნებისმიერი ქსოვილის უჯრედებში დნმ-ის დაზიანების ჩაწერის შესაძლებლობა in vivo, საჭირო ექსპერიმენტული მასალის მინიმალური რაოდენობა, შედარებით დაბალი ღირებულება, მაღალი „პლასტიურობა“, რაც საშუალებას იძლევა გამოიყენოს მეთოდი შერჩევითი რეგისტრაციისთვის მცირე ცვლილებებით. სხვადასხვა კატეგორიებიდნმ-ის დაზიანება და დაკავშირებული მოვლენები. ექსპერიმენტების სიჩქარე და ლაბორატორიული პროტოკოლის შედარებითი სიმარტივე მიმზიდველია. დღეს არსებობს კონსენსუსი იმის თაობაზე, რომ საჭიროა „დნმ კომეტის“ მეთოდის, როგორც ინდიკატორის ტესტის ჩართვის სისტემაში გენოტოქსიურობის ექსპერტიზის შეფასება in vitro და in vivo. რუსეთში ეს მეთოდი შეტანილი იყო რიგ მეთოდოლოგიურ რეკომენდაციებსა და მითითებებში.
გარდა ამისა, უნდა აღინიშნოს „დნმ კომეტის“ მეთოდის, როგორც ინდიკატორის ტესტის გამოყენების პერსპექტივა ეპიდემიოლოგიურ, სხვადასხვა სახის ექსპერიმენტულ და კლინიკურ კვლევებში პირველადი დნმ-ის დაზიანების ეტიოპათოგენეტიკური როლის შესწავლისას, აგრეთვე „სიცოცხლის ხარისხის“ შესაფასებლად. ბიოლოგიური სისტემის გარკვეულ გარემო პირობებში.
"დნმ კომეტის" მეთოდის შესრულების პროცედურების სტანდარტიზაცია მნიშვნელოვანია სხვადასხვა მკვლევარის მიერ მიღებული შედეგების კონვერგენციის უზრუნველსაყოფად და ექსპერიმენტებში გაურკვეველი და/ან ცრუ მონაცემების გამომწვევი სიტუაციების თავიდან ასაცილებლად.
ლიტერატურა
1. კუზინი ა.მ. სტრუქტურულ-მეტაბოლური თეორია რადიობიოლოგიაში. - მ.: ნაუკა, 1986. - 283გვ.
2. მეერსონ ფ.ზ. ადაპტაცია, სტრესი და პრევენცია. - მ.: ნაუკა, 1981. - 278გვ.
3. კომეტის ანალიზი ტოქსიკოლოგიაში / Dhawan A. and Anderson D. (Eds.); RSC Publisher, დიდი ბრიტანეთი, ლონდონი, 2009 წ.
4. კოლინზი ა.რ. კომეტის ანალიზი დნმ-ის დაზიანებისა და შეკეთებისთვის: პრინციპები, პროგრამები და შეზღუდვები // Mol Biotech. - 2004. - V. 26. - გვ. 229-261.
5. Ostling O., Johanson K.J. ძუძუმწოვრების ცალკეულ უჯრედებში რადიაციით გამოწვეული დნმ-ის დაზიანების მიკროელექტროფორეზული შესწავლა. Biochem Biophys Res Commun. -1984 წ. - 123. - გვ 291-298.
6. Olive P.L., Banath J.P. კომეტის ანალიზი: დნმ-ის დაზიანების გაზომვის მეთოდი ცალკეულ უჯრედებში // Nat Protoc. - 2006. - 1 (1). - გვ.23-29.
7. სოროჩინსკაია უ.ბ., მიხაილენკო ვ.მ. "დნმ კომეტის" მეთოდის გამოყენება გარემოსდაცვითი აგენტებით გამოწვეული დნმ-ის დაზიანების შესაფასებლად // ონკოლოგია. - 2008. - ტ.10, No3. - გვ.303-309.
8. დურნევი ა.დ., ჟანატაევი ა.კ., ანისინა ე.ა. და სხვა. - მ., 2006. - 28გვ.
9. ჟანატაევი A.K., Nikitina V.A., Voronina E.S., Durnev A.D. დნმ-ის დაზიანების შეფასების მეთოდოლოგიური ასპექტები "დნმ კომეტის" მეთოდით // გამოყენებითი ტოქსიკოლოგია. - 2011. - T.2, No2 (4). - გვ.28-37.
10. Hartmann A. და სხვ. რეკომენდაციები in vivo ტუტე კომეტის ანალიზის ჩასატარებლად // მუტაგენეზი. -2003 წ. - V. 18. - R. 45-51.
11. Kumaravel T.S., Vilhar B., Stephen P. et al. Comet Assay გაზომვები: პერსპექტივა // Cell Biol. ტოქსიკოლი. - 2009. - 25 (1). - გვ 53-64.
12. გენოტოქსიური თვისებების შეფასება „დნმ კომეტის“ მეთოდით in vitro: მეთოდოლოგიური რეკომენდაციები. - მ.: როსპო-ტრებნადზორის ჰიგიენისა და ეპიდემიოლოგიის ფედერალური ცენტრი, 2010 წ.
13. Tomás Gichner, Zde^nka Patková, Ji"rina Száko-vá, Kate"rina Demnerova. კადმიუმი იწვევს თამბაქოს ფესვებში დნმ-ის დაზიანებას, მაგრამ არა დნმ-ის დაზიანებას, სომატურ მუტაციებს ან
ჰომოლოგიური რეკომბინაცია თამბაქოს ფოთლებში // მუტაციის კვლევა. - 2004. - 559. - გვ.49-57.
14. ზეთისხილი PL. დნმ-ის დაზიანება და შეკეთება ცალკეულ უჯრედებში: კომეტის ანალიზის გამოყენება რადიობიოლოგიაში // Int J Radiat Biol. - 1999. - 75. - გვ.395-405.
15. Xie H., Wise S.S., Holmes A.L. და სხვ. კანცეროგენული ტყვიის ქრომატი იწვევს დნმ-ის ორჯაჭვიან რღვევებს ადამიანის ფილტვის უჯრედებში // Mutat Res. - 2005. - 586 (2). -C. 160-172 წწ.
16. Yasuhara S., Zhu Y., Matsui T. და სხვ. კომეტის ანალიზის, ელექტრონული მიკროსკოპისა და ნაკადის ციტომეტრიის შედარება აპოპტოზის გამოსავლენად // Journal Histochem. ციტოქიმია. - 2003. - 51 (7). - გვ 873-885.
17. Olive P.L., Banath J.P. უაღრესად ფრაგმენტირებული დნმ-ის ზომის განსაზღვრა ცალკეულ აპოპტოზურ უჯრედებში კომეტის ანალიზის და დნმ-ის ჯვარედინი დამაკავშირებელი აგენტის გამოყენებით // Exp. Cell Res. - 1995. -221 (1). - გვ 19-26.
18. Collins A.R., Duthie S.J. და Dobson V.L. ადამიანის ლიმფოციტების დნმ-ში ენდოგენური ჟანგვითი ბაზის დაზიანების პირდაპირი ფერმენტული გამოვლენა // კანცეროგენეზი. - 1993. -14. - გვ 1733-1735 წწ.
19. Collins A.R., Dusinska M. and Horska A. ალკილირების დაზიანების გამოვლენა ადამიანის ლიმფოციტების დნმ-ში კომეტის ანალიზით // Acta Biochim. პოლონი. - 2001. -48. - გვ 611-614.
20. სმიტი C.C., O"Donovan M.R. და Martin E.A. HOGG1 აღიარებს ჟანგვითი დაზიანებას კომეტის ანალიზის გამოყენებით უფრო დიდი სპეციფიკით, ვიდრე FPG ან ENDOIII // მუტაგენეზი. - 2006. - 21. - გვ. 185-190.
21. Dusinska M. and Collins A. ალბუმინის პურინების და UV-გამოწვეული ფოტოპროდუქტების გამოვლენა ერთუჯრედიანი უჯრედების დნმ-ში, დაზიანებების სპეციფიკური ფერმენტების ჩართვით კომეტის ანალიზში // ალტერნატიული. ლაბორატორია. ანიმ. - 1996. - 24. - გვ 405-411.
22. დუტი ს.ჯ. და McMillan P. Uracil misincorporation ადამიანის დნმ-ში აღმოჩენილი ერთუჯრედიანი გელის ელექტროფორეზის გამოყენებით // კარცინოგენეზი. - 1997. - 18. - გვ 1709-1714 წწ.
23. Merk O., Speit G. ჯვარედინი კავშირების გამოვლენა კომეტის ანალიზთან დაკავშირებით გენოტოქსიურობასთან და ციტოტოქსიკურობასთან // გარემო. მოლ. მუტაგენი. - 1999. - 33 (2). -პ. 167-172 წწ.
24. სპანსვიკი ვ.ჯ., ჰარტლი ჯ.მ., ჰარტლი ჯ.ა. დნმ-ის ჯვარედინი ჯვარედინი კავშირის გაზომვა ცალკეულ უჯრედებში ერთუჯრედიანი გელის ელექტროფორეზის (კომეტა) ანალიზის გამოყენებით // მეთოდები მოლ. ბიოლ. - 2010. - 613. - გვ 267-282.
25. Hartley J.M., Spanswick V.J., Gander M. და სხვ. დნმ-ის ჯვარედინი კავშირის გაზომვა პაციენტებში, რომლებიც იმყოფებიან ifosfa-mide თერაპიაზე, ერთუჯრედიანი გელის ელექტროფორეზის (კომეტის) ანალიზის გამოყენებით // Clin. კიბოს რეზ. - 1999. - 5. - გვ 507512.
26. Wentzel J.F., Gouws C., Huysamen C. და სხვ. ცალკეული უჯრედების დნმ-ის მეთილაციის სტატუსის შეფასება კომეტის ანალიზით // ანალ. ბიოქიმი. - 2010. - 400 (2). -პ. 190-194 წწ.
27. ტოქსიკოლოგიის ეროვნული პროგრამა, მოხსენება კანცეროგენების შესახებ. - 2007 წელი; მეთერთმეტე გამოცემა.
28. Sasaki YF, Sekihashi K, Izumiyama F. და სხვ. კომეტის ანალიზი თაგვის მრავალი ორგანოთი: კომეტის ანალიზის შედეგების და კანცეროგენურობის შედარება IARC მონოგრაფიასა და აშშ-ს NTP კანცეროგენობის მონაცემთა ბაზიდან შერჩეულ 208 ქიმიკატთან // Crit Rev Toxicol. - 2000. -30 (6). - გვ.629-799.
29. ნანომასალების უსაფრთხოების ტოქსიკოლოგიური და ჰიგიენური შეფასება: გაიდლაინები. - მ.: მომხმარებელთა უფლებების დაცვისა და ადამიანის კეთილდღეობის ზედამხედველობის ფედერალური სამსახური, 2009 წ.
მიღებულია რედაქტორის მიერ 25.02.2014
UDC 636.082.12
იაკუტიის ნახირის ჯიშების ცხენების სისხლის ცილების პოლიმორფიზმის ცვალებადობა
A.V. ჩუგუნოვი, ნ.პ. ფილიპოვა, მ.ნ. ხალდეევა, ნ.პ. სტეპანოვი
იაკუტის, მეგეჟეკის და პრილენსკის ჯიშის ნახირის ცხენების ალელური აუზი შესწავლილი იყო ორი პოლიმორფული სისხლის სისტემის გამოყენებით და გენეტიკური განსხვავებების ხარისხი ტრანსფერინისა და ალბუმინის ტიპებში ცხენის პოპულაციებს შორის სახას რესპუბლიკის (იაკუტია) სხვადასხვა რეგიონში. ) შეიქმნა. შესწავლილი ჯიშის ცხენები აჩვენებდნენ ჰეტეროზიგოტური გენოტიპების ნაკლებობას, რაც მიუთითებს დადებითი Fis სიდიდით. კვლევამ აჩვენა, რომ სამი ჯიშის ნახირი ცხენების პოპულაციები სტაბილურ გენურ ბალანსშია ორ ლოკზე.
საკვანძო სიტყვები: ალელური აუზი, პოლიმორფული სისხლის სისტემები, ლოკუსი, იაკუტი, მეგეჟეკი, პრილენსკაიას ცხენის ჯიშები.
შესწავლილია იაკუტის, მეგეჟეკსკის და პრილენსკის ჯიშის ნახირის ცხენების ალელური აუზი ორ პოლიმორფულ სისხლის სისტემაზე. ტრანსფერინისა და ალბუმინის ტიპებზე გენეტიკური განსხვავებების ხარისხი პოპულაციებს შორის
ჩუგუნოვი აფანასი ვასილიევიჩი - სოფლის მეურნეობის მეცნიერებათა დოქტორი, პროფ. იაგშა, [ელფოსტა დაცულია]; ფილიპოვა ნატალია პავლოვნა - დოქტორი, იაროსლავის სოფლის მეურნეობის მეცნიერებათა სახელმწიფო აკადემიის ასოცირებული პროფესორი, [ელფოსტა დაცულია]; ხალდეევა მატრიონა ნიკოლაევნა - სოფლის მეურნეობის მეცნიერებათა კანდიდატი, უფროსი მასწავლებელი YASA-ში, [ელფოსტა დაცულია]; სტეპანოვი ნიკოლაი პროკოპიევიჩი - სოფლის მეურნეობის მეცნიერებათა კანდიდატი, კათედრის ასოცირებული პროფესორი. იაგშა, [ელფოსტა დაცულია].
ერთუჯრედიანი გელის ელექტროფორეზის მეთოდი, ან დნმ-ის კომეტის მეთოდი, ძალიან მგრძნობიარეა და იძლევა უაღრესად საიმედო შედეგებს, ამავე დროს შედარებით მარტივი და სწრაფი შესრულება და საერთაშორისო სტანდარტიზებულია (OECD No. 489). ეს მეთოდი ყველაზე პერსპექტიულია შემდეგი პრობლემების გადასაჭრელად:
ადამიანებისა და გარემოს ბიომონიტორინგი, ანუ გამოწვეული მუტაგენეზის შედეგების იდენტიფიცირება ქსენობიოტიკებთან (მედიკამენტები, საკვები დანამატები, პესტიციდები, სუნამოები და კოსმეტიკა, საყოფაცხოვრებო ქიმიკატები, აგრეთვე წყლის, ჰაერის და სამრეწველო ყველაზე გავრცელებული დამაბინძურებლები). საფრთხეები, ნანომასალები);
ონკოლოგიური კვლევა;
დნმ-ის აღდგენის სისტემების კვლევა;
მეთოდი ეფუძნება სხვადასხვა მობილურობის ჩაწერას დაზიანებული დნმ-ის მუდმივ ელექტრულ ველში და/ან ცალკეული ლიზირებული უჯრედების დნმ-ის ფრაგმენტებში, რომლებიც ჩასმულია თხელი აგაროზის გელში სტანდარტული შუშის სლაიდზე. ამ შემთხვევაში, უჯრედის დნმ მიგრირებს, წარმოქმნის ელექტროფორეზულ კვალს, რომელიც ვიზუალურად წააგავს „კომეტის კუდს“, რომლის პარამეტრები დამოკიდებულია დნმ-ის დაზიანების ხარისხზე. ელექტროფორეზის დასრულების შემდეგ, სლაიდები შეღებილია და ანალიზდება ფლუორესცენტური მიკროსკოპის გამოყენებით.
გამოსახულების მიღება და მონაცემთა დამუშავება ხორციელდება ტექნიკისა და პროგრამული უზრუნველყოფის კომპლექსის გამოყენებით, რომელიც მოიცავს უაღრესად მგრძნობიარე კამერას მიკროსკოპთან და სპეციალიზებულ პროგრამულ უზრუნველყოფასთან ერთად.
ამ კომპლექსში შემავალი უნივერსალური ინტელექტუალური პროგრამა უზრუნველყოფს:
დნმ-ის კომეტების გამოსახულების ანალიზის ავტომატიზაცია „ერთი დაჭერით“, მოიცავს ყველა ძირითად საზომ პარამეტრს, მათ შორის % დნმ კომეტის კუდში;
- მაღალი რეპროდუქციულობა;
დნმ-ის კომეტების პარამეტრების ანალიზი ტარდება როგორც „რეალურ დროში“, ასევე შენახული ციფრული სურათებიდან;
პროგრამა ამუშავებს მონაცემებს და აჩვენებს მათ პროტოკოლის სახით საერთაშორისო GLP მოთხოვნების შესაბამისად;
მონაცემთა ანალიზი და შედარება;
პროგრამა სრულად არის დადასტურებული და შეესაბამება საერთაშორისო GLP მოთხოვნებს. აქვს იერარქიული წვდომა და მონაცემთა დაცვის სისტემა.
კომპლექტში შედის:
1. ფლუორესცენტური სამედიცინო და ბიოლოგიური მიკროსკოპი Nikon Eclipse Ni-E.
2. ეპიფლუორესცენტური განათების სისტემა 50W სიმძლავრით, ფილტრი-დიქრონიკული სარკე-ფილტრის ნაკრები DAPI, FITC, TRITC საღებავებისთვის.
3. მონოქრომული CCD IEEE1394 FireWire ვიდეო კამერა ლუმინესცენციისთვის. Basler Scout scA1300-32fm. პიქსელის ზომა - 3,75 μm x 3,75 μm. გარჩევადობა - 1296 px x 966 px. სენსორის ზომაა 1/3 ინჩი. მატრიცა - სონი. მონაცემთა გადაცემა მაღალსიჩქარიანი პორტით - 1394 BUS. კადრის ჩვენების სიჩქარე მაქსიმალური გარჩევადობით არის 32 კადრი/წმ. უზრუნველყოფს ობიექტებთან მუშაობას რეალურ დროში
4. Comet Assay IV - პროგრამული პაკეტი Windows-ისთვის ცხრილების გენერატორით Microsoft Excel-ისთვის, მონოქრომული CCD IEEE1394 FireWire ვიდეოკამერით რეალურ დროში მუშაობისთვის (გაზომვები და ანალიზი შესაძლებელია როგორც ვიდეო ნაკადებზე, ასევე ფოტოებზე), ოპერაციული ინსტრუქციები და CD პროგრამის ინსტალაციისა და ვალიდაციისთვის.
5. ლიცენზია ერთწლიანი ოთხი მომხმარებლისთვის.
6. დისტანციური სწავლება ინტერნეტით ოთხი მომხმარებლისთვის.
დამატებით შესთავაზა:
1. მონაცემთა ოპერატორმა გამოიყენოს Comet Assay IV მონაცემთა ბაზების XML ვერსიებში საძიებო ფილტრაციისა და მონაცემების მოპოვებისა და აუდიტის მეშვეობით უსაფრთხო Oracle მონაცემთა ბაზის საშუალებით MS Excel ფორმატში შენახვით ცხრილებში მუშაობისთვის. მოიცავს ავტომატურად შენახული სურათების, ხელმოწერების, დაარქივებული მონაცემების და ავტომატური აუდიტის მონაცემების ნახვის შესაძლებლობას. დამატებით მოიცავს ხელმოუწერელი და ციფრულად ხელმოწერილი მონაცემების XML ფორმატში ექსპორტის შესაძლებლობას. მოყვება Crypto-Key-Prov ციფრულად ხელმოწერილი მონაცემების სხვადასხვა ფორმატში სანახავად.
2. GLP სისტემის წვდომის მენეჯერი. წვდომის მენეჯერი არის პროგრამა მონაცემთა ბაზებზე თანამშრომლების წვდომის მონიტორინგისა და მართვისთვის. PI გენეტიკური ტოქსიკოლოგიის ერთიანი სისტემა. მოიცავს სისტემის ყოვლისმომცველ აუდიტს. გარე აუდიტი. მომხმარებლის ანგარიშების ადმინისტრირება და მომხმარებლის აქტივობები, რომლებიც დაკავშირებულია პროგრამებთან, წვდომასთან, პაროლებთან, აუდიტებთან და ა.შ. იყენებს Oracle-ს მომხმარებლებისა და მონაცემების აუდიტის უსაფრთხოდ დასაცავად. სრული შესაბამისობა FDA 21 CFR ნაწილი 11 საბოლოო წესებთან ელექტრონული ჩანაწერებისა და ელექტრონული ხელმოწერების შესახებ.
3. ერთი მომხმარებლის ტრენინგი Perceptive ინსტრუმენტების საფუძველზე დიდ ბრიტანეთში
1დნმ-ის ფრაგმენტაციის ინდიკატორების შესწავლა დნმ-ის კომეტის მეთოდის გამოყენებით ტუტე მოდიფიკაციაში ჩატარდა საყოფაცხოვრებო პირობებში რადიაციული ფაქტორების ზემოქმედების სხვადასხვა დონის პირობებში. გათვალისწინებული იყო რადონის მოცულობითი აქტივობა (VA), გამა გამოსხივების ატმოსფერული ექვივალენტური დოზის სიჩქარე (AEDR) და ბეტა გამოსხივების ნაკადის სიმკვრივე. რადონის OA-ს საშუალო მნიშვნელობა შიდა ჰაერში იყო 89.4 Bq/m3, გამა ფონური MAED მნიშვნელობა იყო 0.12 μSv/h და ბეტა გამოსხივების ნაკადის სიმკვრივე იყო 0.6 s-1. დნმ-ის ფრაგმენტაციის საშუალო დონე იყო 3,48%. დნმ-ის ფრაგმენტაციის დონე 3 ინდიკატორის მიხედვით (დნმ-ის პროპორცია კომეტის კუდში, კომეტის კუდის სიგრძე, კომეტის კუდის მომენტი) გაიზარდა მამაკაცებში, მაგრამ ამ ტენდენციამ არ მიაღწია სტატისტიკურ მნიშვნელობას. დნმ კომეტის ქულები მნიშვნელოვნად არ განსხვავდებოდა რადონის დონის ცვლილებების ფუნქციის მიხედვით. აღმოაჩინეს დნმ-ის კომეტის ინდიკატორების დადებითი კორელაცია გამა გამოსხივების სიმძლავრის მატებასთან. ამავდროულად, გამა გამოსხივების DER იყო მისაღებ საზღვრებში ყველა გამოკვლეულ შენობაში.
მაიონებელი გამოსხივება
დნმ კომეტები
დნმ-ის კომეტების ტუტე მოდიფიკაცია
რადიაციის დაბალი დოზების ეფექტი
1. Robertson A., Allen J., Laney R., Curnow A. რადონის ზემოქმედების უჯრედული და მოლეკულური კანცეროგენული ეფექტები: მიმოხილვა // Int. ჯ.მოლი. მეცნიერება, 2013, ტ. 14, არა. 7, გვ. 14024-14063 წწ.
2. დრუჟინინი V.G., Sinitsky M.Y., Larionov A.V. და სხვ. ქრომოსომის აბერაციების დონის შეფასება პერიფერიული სისხლის ლიმფოციტებში ხანგრძლივ რეზიდენტ ბავშვებში რადონისა და მისი დაშლის პროდუქტების მაღალი ზემოქმედების პირობებში // მუტაგენეზი, 2015, ტ. 30, გვ. 677–683 წწ.
3. Singh N.P., McCoy M.T., Tice R.R., Schneider E.L. მარტივი ტექნიკა ცალკეულ უჯრედებში დნმ-ის დაზიანების დაბალი დონის რაოდენობრივი დასადგენად // Exp. Cell Res., 1988, ტ. 175, გვ. 184–191 წწ.
4. Azqueta A., Gutzkow K.B., Brunborg G., Collins A.R. კომეტის უფრო საიმედო ანალიზისკენ: აგაროზის კონცენტრაციის ოპტიმიზაცია, განტვირთვის დრო და ელექტროფორეზის პირობები // Mutat. რეზ., 2011, ტ. 724, No. 1–2, გვ. 41-45.
5. Konca K., Lankoff A., Banasik A. და სხვ. ჯვარედინი პლატფორმის საჯარო დომენის კომპიუტერის გამოსახულების ანალიზის პროგრამა კომეტის ანალიზისთვის // მუტაციის კვლევა, 2003, ტ. 534, გვ. 15-20.
6. Glantz S.A. ბიოსტატისტიკის პრაიმერი / S.A. გლანცი. – McGraw-Hill Medical, 7 გამოცემა, 2011. – 320 გვ.
7. Georgakilas A.G., O’Neill P., Stewart R.D. ჯგუფური დნმ-ის დაზიანებების ინდუქცია და შეკეთება: რა ვიცით აქამდე? //რადიატი. რეზ., 2013, ტ. 180, გვ. 100–109 წწ.
8. Kaur S., Sangeeta, Galhna K.K., Gautam N. შეფასება რადიაციით გამოწვეული დნმ-ის დაზიანების შეფასება ადამიანის პერიფერიულ სისხლის ლიმფოციტებში COMET ანალიზის გამოყენებით // Int. J. Life Sci. მეცნიერი. რეზ., 2017, ტ. 3, არა. 4, გვ. 1208-1214 წწ.
9. Miklos M., Gajski G., Garaj-Vrhovac V. სტანდარტული და მოდიფიცირებული კომეტის ანალიზის გამოყენება ადამიანის ლიმფოციტებში დნმ-ის დაზიანების შეფასებისას მაიონებელი გამოსხივების ზემოქმედების შემდეგ // Radiology and Oncology, 2009, ტ. 43, არა. 2, გვ. 97-107 წწ.
10. ბატარ ბ., გუვენ მ., ბარის ს. და სხვ. დნმ-ის აღდგენის გენი XPD და XRCC1 პოლიმორფიზმი და ბავშვობაში მწვავე ლიმფობლასტური ლეიკემიის რისკი // ლეიკ. რეზ., 2009, ტ. 33. გვ. 759–763 წწ.
11. Jiang J., Zhang X., Yang H., Wang W. დნმ-ის სარემონტო გენების პოლიმორფიზმი: ADPRT, XRCC1 და XPD და კიბოს რისკი გენეტიკურ ეპიდემიოლოგიაში // მეთ. მოლ. ბიოლ., 2009, ტ. 471. გვ. 305–333 წწ.
12. ლარიონოვი A.V., Sinitsky M.Yu., Druzhinin V.G. და სხვ. დნმ-ის ამოკვეთის შეკეთება და ორჯაჭვიანი შესვენების აღდგენის გენის პოლიმორფიზმი და ქრომოსომის აბერაციის დონე ბავშვებში რადონის ხანგრძლივი ზემოქმედებით // Int. ჯ.რადიატი. ბიოლ., 2016, ტ. 92, არა. 8, გვ. 466-474 წწ.
13. Wojewodzka M., Kruszewski M., Iwanenko T. et al. მოწევის ჩვევის არასასურველი ეფექტის ნაკლებობა დნმ-ის ჯაჭვის გატეხვასა და ბაზის დაზიანებაზე, როგორც ეს გამოვლინდა ტუტე კომეტის ანალიზით // მუტატი. რეზ., 1999, ტ. 440, გვ. 19–25.
14. Geric M., Gajski G., Orescanin V., Garaj-Vrhovac V. სეზონური ვარიაციები, როგორც კომეტის ანალიზის პარამეტრების პროგნოზირებადი ფაქტორები: რეტროსპექტული კვლევა // Mutagenesis, 2017, doi:10.1093/mutage/gex023.
რადონის ეფექტი კარგად არის შესწავლილი მაღალი კონცენტრაციის დიაპაზონში. დადგენილი ჰიგიენური სტანდარტები ითვალისწინებს ეკვივალენტური წონასწორობის მოცულობითი აქტივობის დონეს (ERVA) 200 Bq/m3, როგორც საცხოვრებელი ფართის ჰაერში რადონის დასაშვები მოცულობითი აქტივობის ზღვარი. ამასთან, რიგ ქვეყნებში დასაშვები დონე გაიზარდა 400 ბკ/მ3-მდე, რაც, პირველ რიგში, ტერიტორიის გეოლოგიური თავისებურებებით აიხსნება. მეორე მხრივ, არსებობს მოსაზრება დასაშვები დონის 2 pCu/l-მდე შემცირების აუცილებლობის შესახებ, რაც შეესაბამება 74 Bq/m3. ჯანდაცვის მსოფლიო ორგანიზაციის თანამედროვე პარადიგმისა და რადიაციული ეფექტების წრფივი, არაზღვრული ზრდის პრინციპის ფარგლებში, რადიაციის მცირე ზემოქმედებაც კი იწვევს სტოქასტური ეფექტების (პირველ რიგში კიბო) რისკის ზრდას.
აშკარაა, რომ მცირე რადიაციული ეფექტი, რომელიც გავლენას ახდენს ადამიანთა დიდ ჯგუფზე, შეიძლება გამოიწვიოს კიბოს შემთხვევების სოციალურად მნიშვნელოვანი ზრდა. შედეგად, ძალზე აქტუალურია ინფორმაციის დაგროვება სხვადასხვა ტიპის მაიონებელი გამოსხივების ზემოქმედების შესახებ მცირე დოზებით, რომელსაც ამა თუ იმ ხარისხით ექვემდებარება პლანეტის მთელი მოსახლეობა. რადიონის ენერგიის შემცველობის ზრდა 200 Bq/m3-ზე მეტი არასასურველია რადიაციული ჰიგიენის სფეროში ყველაზე მიღებული სტანდარტების მიხედვით. ამავდროულად, საცხოვრებელი ფართის მხოლოდ 5-10% შეიძლება კლასიფიცირდეს ამ დონის ექსპოზიციის შენობებად. რადონის მოცულობითი აქტივობის (VA) დონე 2 pCiu/l (74 Bq/m3) და მეტი შეიძლება შეინიშნოს საცხოვრებელი ფართების 20-50%-ში, შენობის ტიპისა და გეოგრაფიული მდებარეობის მიხედვით. აშკარაა, რომ რადონის დაბალი ინტენსივობის ზემოქმედებამაც კი შეიძლება გამოიწვიოს ავადობის მნიშვნელოვანი ზრდა, პრობლემის გლობალური მასშტაბის გათვალისწინებით. როგორც ჩანს, რელევანტურია მჭიდრო მაიონებელი გამოსხივების დაბალი დოზით დატვირთვის ზემოქმედების შესწავლა ადამიანის სხეულზე.
რადონი ამჟამად აღიარებულია, როგორც ერთ-ერთი ყველაზე საშიში კანცეროგენი, რომელიც გავლენას ახდენს ადამიანებზე. ბუნებაში, რადიაციის რადონის ფაქტორი არ თამაშობს მნიშვნელოვან როლს, რადგან რადონის გაზი ნაწილდება ჰაერის დიდ მოცულობაში და საკმაოდ სწრაფად იშლება (Rn222-ის ნახევარგამოყოფის პერიოდი = 3,82 დღე). ამავდროულად, საცხოვრებელი და ტექნიკური შენობები არის თავისებური ხაფანგები, რომლებიც აგროვებენ რადონს (10-ჯერ შედარებით. ღია ცის ქვეშ). რადონის ემისიის ფოკუსები ხშირად განლაგებულია სპორადულად და რადონი ითვლება ქრომოსომული აბერაციების გაზრდის მთავარ მიზეზად მსგავს ექსპოზიციურ ჯგუფებში.
ერთ-ერთი ეფექტური მეთოდებიბიომონიტორინგი არის სისხლის უჯრედებში დნმ-ის დაზიანების ხარისხის პირდაპირი შეფასება "დნმ კომეტის" მეთოდის გამოყენებით (ცალკეული უჯრედების გელის ელექტროფორეზი). ეს მეთოდი გულისხმობს აგაროზას გელში მოთავსებული უჯრედების ლიზას, ხოლო დნმ მიგრირებას ელექტრულ ველში. ორმაგი შესვენების გაზრდილი სიხშირის მქონე უჯრედებს ახასიათებთ დნმ-ის გაზრდილი მიგრაცია ანოდისკენ. 1988 წელს სინგისა და კოლეგების მუშაობამ შესთავაზა მეთოდის ტუტე მოდიფიკაცია, ლიზისის საფეხურის ჩათვლით pH>13-ზე. ეს ვერსია მნიშვნელოვნად ზრდის მეთოდის მგრძნობელობას, რაც საშუალებას იძლევა გამოავლინოს ერთჯერადი შესვენებები, ტუტე-ლაბილი ადგილები, დნმ-დნმ და დნმ-ცილა ჯვარედინი კავშირები, ასევე არასრული შეკეთების ადგილები. ვინაიდან დნმ-ის ცალკეული რღვევების ეფექტი ჭარბობს გენოტოქსიკანტების უმეტესობისთვის, მეთოდის ტუტე მოდიფიკაციამ შესაძლებელი გახადა მნიშვნელოვნად გაზარდოს ტესტის ინფორმაციის შინაარსი და მგრძნობელობა. ერთ-ერთი მთავარი უპირატესობაა გენოტოქსიური ეფექტების იდენტიფიცირების შესაძლებლობა ციტოტოქსიური ფაქტორების ერთდროული მოქმედების პირობებში, რაც იწვევს ქრომოსომული ანომალიების წარმოქმნას, მაგრამ არ გააჩნია გენოტოქსიური ეფექტი. pH>12 პირობებში დნმ-ის დენატურაცია ხდება და ძაფები იშლება 2 სპირალს შორის წყალბადის ბმების განადგურების გამო. როდესაც pH მიაღწევს 12.6-ს, ტუტე-ლაბილი ადგილები, როგორიცაა აპურინული/აპირიმიდინური ადგილები, გარდაიქმნება დნმ-ის ცალკეულ რღვევებად. pH>13-ზე მიიღწევა ტუტე-ლაბილი ადგილების ტრანსფორმაციის მაქსიმალური ხარისხი.
მასალები და მეთოდები
ნიმუშის მახასიათებლები
თითოეულმა გამოკვლეულმა პირმა შეავსო პირადი კითხვარი, რომელიც მოიცავდა ინფორმაციას ასაკის, ჯანმრთელობის მდგომარეობის, თამბაქოს და ალკოჰოლის მოხმარების, პროფესიული რისკების, რენტგენოლოგიური დიაგნოსტიკური პროცედურების, საჰაერო მოგზაურობის, ვაქცინაციისა და გამოკვლევის წინა 3 თვის განმავლობაში მიღებული მედიკამენტების შესახებ. შეირჩა 39 სუბიექტისგან შემდგარი ჯგუფი, რომლებიც არ ექვემდებარებოდნენ პოტენციურად გენოტოქსიურ ფაქტორებს. ყველა გამოკვლეული იყო 40 წელზე უფროსი ასაკის. სულ გამოიკვლია 18 მამაკაცი (საშუალო ასაკი 29 წელი) და 21 ქალი (საშუალო ასაკი 31 წელი).
კვლევა ჩატარდა კემეროვოს ეთიკის კომისიის მოთხოვნების შესაბამისად სახელმწიფო უნივერსიტეტი, კვლევის ოქმი დამტკიცდა კომისიის No4 სხდომაზე 2016 წლის 10 ოქტომბერს. თითოეულმა მონაწილემ ხელი მოაწერა ინფორმირებული თანხმობის ფორმას, რომელიც შეიცავს ინფორმაციას კვლევის მიზნების შესახებ.
ბიომასალის ნიმუშები
ნიმუშები ვენური სისხლიშეგროვებული 4 მლ ვაკუუმ ტუბებში, რომლებიც შეიცავს ნატრიუმის EDTA-ს, როგორც ანტიკოაგულანტს. მასალის შეგროვება მიმდინარეობდა 2016 წლის ნოემბრიდან 2017 წლის აპრილამდე. 1-2 საათის განმავლობაში ნიმუშები ლაბორატორიაში გადაიტანეს. ყველა ნიმუში იყო კოდირებული და დამუშავებული. დნმ-ის კომეტის მეთოდი ნიმუშების მიღებისთანავე დაიწყო.
ცალკეული უჯრედების გელის ელექტროფორეზი (დნმ კომეტის მეთოდი)
დნმ-ის კომეტის მეთოდი შესრულდა ტუტე მოდიფიკაციაში, რომელიც შემუშავებულია სინგჰ და სხვების მიერ. გელის პირველი ფენა იყო სტანდარტული აგაროზის 1%-იანი ხსნარი (Applichem, აშშ). უჯრედების დასაფარად გამოიყენეს 1% აგაროზა დაბალი დნობის წერტილით (დაბალი დნობის წერტილის აგაროზა, Applichem, აშშ) 39 °C ტემპერატურაზე. 70 μl სისხლის უჯრედების სუსპენზია დაბალი დნობის აგაროზაში დაემატა სტანდარტული აგაროზის ჭიქას და მოათავსეს ყინულზე, სანამ ლარი მთლიანად არ გამაგრდებოდა. გამაგრების შემდეგ სლაიდები მოთავსებულია ლიზის ბუფერში 4°C ტემპერატურაზე 12 საათის განმავლობაში. ლიზის ბუფერის შემადგენლობა: 2,5 მოლ/ლ NaCl (ვექტონი, რუსეთი), 0,1 მოლ/ლ Na2EDTA (ვექტონი, რუსეთი), 1% Triton X-100 (ამრესკო, აშშ), 10% DMSO („ვექტონი“, რუსეთი) . ლიზისის შემდეგ ჰორიზონტალური ელექტროფორეზი (300 mA, 25 V, 30 min) ჩატარდა ტუტე ბუფერში (pH>13). ელექტროფორეზის წინ უძღოდა 20 წთ. მკურნალობა ტუტე ბუფერით (300 მმ NaOH (ვექტონი, რუსეთი), 1 მმ Na2EDTA (ვექტონი, რუსეთი). ლიზისი და ელექტროფორეზი ჩატარდა 4 °C-ზე პირდაპირი მზის არარსებობის პირობებში. ელექტროფორეზის შემდეგ სათვალეები სამჯერ განეიტრალდა ფოსფატით დამუშავებული ფიზიოლოგიური ხსნარი PBS 7,5 (ამრესკო, აშშ).
კომეტის ანალიზი
ფრაგმენტაციის პარამეტრები შეფასდა SYBR GREEN-ით შეღებილი პრეპარატების მიკროფოტოგრაფიით, Zeiss Axio Imager 2 მიკროსკოპის გამოყენებით. სულ 100 შემთხვევით შერჩეული კომეტა გადაღებულია x400 გადიდებით. ფოტოების შემდგომი დამუშავება განხორციელდა CASP პროგრამული პაკეტის გამოყენებით. გამოთვალეს კომეტის კუდის სიგრძის პარამეტრები, კუდის მომენტი და კომეტის კუდის დნმ-ის ფრაქცია.
სტატისტიკური მეთოდები
სტატისტიკური მონაცემების ანალიზი ჩატარდა Statistica 10.0 პაკეტის გამოყენებით. რაოდენობრივი ინდიკატორებისთვის გამოითვალა საშუალო და 95% ნდობის ინტერვალის ლიმიტები (CI 95). ჯგუფური შედარება განხორციელდა Mann-Whitney U ტესტის გამოყენებით. მნიშვნელოვნების დონე აღებულია 5%-ის დონეზე. არაპარამეტრული მონაცემების ქულებს შორის კორელაციები გამოითვლებოდა წოდებებისთვის პირსონის კორელაციის კოეფიციენტის გამოყენებით. ამავდროულად, 50-ზე მეტი ადამიანის ნიმუშებისთვის, ასევე გამოითვალა სტუდენტის ტესტის მნიშვნელობა, პირსონის კორელაციის კოეფიციენტის მნიშვნელობის საფუძველზე.
შედეგები
კომეტის კუდში დნმ-ის წილი 15%-ს არ აღემატებოდა. რადონის საშუალო მოცულობითი აქტივობა (VA) შიდა ჰაერში იყო 89,4 Bq/m3, გამა ფონის DER იყო 0,12 μSv/h და ბეტა გამოსხივების ნაკადის სიმკვრივე იყო 0,6 s-1. დნმ-ის ფრაგმენტაციის დონე 3 ინდიკატორის მიხედვით გაიზარდა მამაკაცებში, მაგრამ ამ ტენდენციამ არ მიაღწია სტატისტიკურ მნიშვნელობას (ცხრილი 1).
ცხრილი 1
დნმ-ის ფრაგმენტაციის ინდიკატორები გამოკვლეულ მამაკაცებსა და ქალებში
ჰაერში რადონის OA-ს სასაზღვრო დონედ არჩეული იყო 74 Bq/m3 დონე, რომელიც შეესაბამება 2 pCiu/l ჰაერს. საშუალო რადონის OA იყო 47 Bq/m3 პირველ ჯგუფში და 143 Bq/m3 მეორე ჯგუფში. ყველაზე დიდი საინფორმაციო შინაარსი შეიქმნა კომეტების კუდის მომენტის ინდიკატორისთვის. კუდის მომენტი გაიზარდა რადონის მაღალი დონის მქონე ჯგუფში, მაგრამ ეს ტენდენცია არ მიაღწია სტატისტიკური მნიშვნელობის დონეს (ცხრილი 2). ეს ტენდენცია დამახასიათებელია მხოლოდ გამოკითხული მამაკაცებისთვის.
ცხრილი 2
დნმ-ის ფრაგმენტაციის ინდიკატორები ჯგუფებში, რომლებიც დიფერენცირებულია სქესის და რადონის OA-ს მიხედვით
|
რადონი OA შიდა ჰაერში, Bq/m3 |
% დნმ კომეტის კუდში |
კუდის სიგრძე, მმ |
კომეტის კუდის მომენტი |
|
|
3,65 |
13,73 |
0,94 |
||
|
3,97 |
14,52 |
1,43 |
||
|
3,30 |
13,21 |
0,88 |
||
|
3,00 |
11,95 |
0,72 |
||
|
3,43 |
13,42 |
0,90 |
||
|
3,51 |
13,30 |
1,09 |
||
ასევე გამოკვლეული იქნა დნმ-ის ინდიკატორების შესაძლო დამოკიდებულება DER-ის გამა გამოსხივების სიდიდეზე საცხოვრებელ შენობებში. გადამოწმებისთვის გამოითვალა კორელაციის კოეფიციენტი დნმ-ის დაზიანების ინდიკატორებსა და გამა გამოსხივების DER-ს შორის. დაფიქსირდა დადებითი კორელაცია დნმ-ის კომეტის ინდიკატორებსა და გამა გამოსხივების სიმძლავრის ზრდას შორის (სურათი). ამავდროულად, გამა გამოსხივების DER იყო მისაღებ საზღვრებში ყველა გამოკვლეულ შენობაში.
დნმ-ის ფრაგმენტაციის ინდიკატორების დამოკიდებულება საცხოვრებელ შენობებში გამა გამოსხივების DER-ზე (r - Spearman-ის კორელაციის კოეფიციენტი, p - "ნულის" ჰიპოთეზის ალბათობა)
დისკუსია
რადიაციის ექსპოზიცია
მაიონებელი გამოსხივება შეიძლება გამოიწვიოს დნმ-ის დაზიანების გროვების წარმოქმნა, რაც ხდება ორჯაჭვიანი რღვევის და კომპაქტურად განლაგებული სხვა დაზიანების სახით. იშვიათი და მკვრივი მაიონებელი გამოსხივება იწვევს დნმ-ის ცალკეული დაზიანებების დაახლოებით ერთსა და იმავე რაოდენობას აბსორბირებულ დოზაზე, მაგრამ მკვრივი მაიონებელი გამოსხივების შემთხვევაში (ალფა ნაწილაკები), ეს დაზიანებები ნაწილდება დნმ-ის ნაკლებ უბნებზე, რაც გულისხმობს დაზიანებების რაოდენობის ზრდას. მტევანი; მაგალითად, კლასტერში დაზიანებების საშუალო რაოდენობა იზრდება ენერგიის ხაზოვანი გადაცემით. ყველა გამოკვლეულის საცხოვრებელ ადგილებში დაფიქსირებული გამა გამოსხივება არ აღემატება რეგულირებულ ფონურ მნიშვნელობებს. გამა ფონზე ცვლილებები, სავარაუდოდ, შენობებისა და სამშენებლო მასალების თავისებურებებით იყო გამოწვეული.
კომეტის ანალიზი
დნმ-ის კომეტის მეთოდი მარტივია და სწრაფი ტესტი, რაც შესაძლებელს ხდის ეფექტურად გავზომოთ დნმ-ის დაზიანების დონე და დაზიანებების შეკეთება ექსპოზიციის შემდეგ. ამ კვლევაში არ იქნა ნაპოვნი მნიშვნელოვანი ჰეტეროგენულობა საკვლევ პოპულაციაში დნმ-ის დაზიანების დონესთან დაკავშირებით. ბიოლოგიურ დოზიმეტრიას მიძღვნილმა რიგმა ნაშრომებმა ადრე აღნიშნეს რადიაციის დაბალი დოზების ეფექტის იდენტიფიცირების სირთულეები. ამავდროულად, კვლევების უმეტესობამ შეისწავლა გარე ხელოვნური წყაროს მიერ დასხივებული ადამიანების ჯგუფები, მაგალითად, რადიოლოგიური და რენტგენოლოგიური დაწესებულებების პერსონალი.
დნმ-ის ფრაგმენტაციის სიჩქარის გაზომვები შეიძლება ასახავდეს როგორც ინდივიდის დნმ-ის დაზიანების დონეს, ასევე რადიაციული დაზიანების აღდგენის უნარს. მანამდე არაერთმა კვლევამ დაადგინა აღდგენითი გენების უნარი მემკვიდრეობითი მასალის დარღვევების სიხშირის მოდულაციისთვის. დნმ-ის დაზიანების დაფიქსირებული ნიმუში არის ბალანსის შედეგი დაზიანებასა და დნმ-ის შეკეთებას შორის, ხოლო დაზიანების დაბალი დონე ან ძლიერი კორელაციის არარსებობა შეიძლება გამოწვეული იყოს როგორც დაზიანების დაბალი რაოდენობით, ასევე ინდივიდუალური აღდგენის მაღალი ეფექტურობით.
ზოგიერთი შეფასებით, კომეტების დნმ-ის მნიშვნელობების ზრდაში არაპროდუქტიული ფაქტორებისთვის ყველაზე დიდი წვლილი წელიწადის სეზონზე (პარამეტრები იზრდება ზაფხულში) და სამედიცინო ზემოქმედებით. ჩვენს მუშაობაში ამ ფაქტორებს არ შეიძლება ჰქონდეს მნიშვნელოვანი გავლენა, რადგან ბიოლოგიური მასალის შეგროვება განხორციელდა ქ ზამთრის პერიოდიწლის განმავლობაში, და ყველა პირი, რომელსაც ჩაუტარდა რენტგენოლოგიური გამოკვლევა კვლევამდე 3 თვის განმავლობაში, გამოირიცხა ნიმუშიდან. რადიონის მოცულობით კონცენტრაციებთან კორელაციების ნაკლებობა შეიძლება გამოწვეული იყოს ნიმუშის მცირე ზომით. სამომავლოდ იგეგმება კვლევის ამ ხაზის გაგრძელება შერჩევის ზომის ზრდით.
დასკვნა
რადიაციის დაბალი დოზების გრძელვადიანი ზემოქმედების შესწავლა, როგორც ჩანს, რთული ამოცანაა ნიმუშების შერჩევის აუცილებლობამ და მასთან დაკავშირებული ფაქტორების კონტროლი შეიძლება დაამახინჯოს სურათს. წარმოდგენილ კვლევაში შეუძლებელი იყო სტატისტიკურად მნიშვნელოვანი კორელაციების იდენტიფიცირება მოცულობითი რადონის აქტივობის ინდიკატორებთან, მაგრამ ამავდროულად, აღმოჩენილი კორელაციები გამა ფონის ინდიკატორებთან მიუთითებს ამ კვლევის პერსპექტივაზე. აშკარაა საჭიროება შეფასდეს ამ ტიპის კვლევისთვის გამოკვლეული სარემონტო ეფექტურობის ფაქტორი, რაც საშუალებას მისცემს მსგავსი სარემონტო მახასიათებლების მქონე ადამიანების დიფერენცირებას და შედარებას.
ამ კვლევასთან დაკავშირებული ინტერესთა კონფლიქტი არ არის.
კვლევა ჩატარდა რუსეთის ძირითადი კვლევების ფონდის ფინანსური მხარდაჭერით (No 16-34-60069\15 mol_a_dk).
ბიბლიოგრაფიული ბმული
ლარიონოვი A.V., Volobaev V.P., Serdyukova E.S. დნმ კომეტის ინდიკატორების შესწავლა ჯანსაღ დონორებში საცხოვრებელი ფართის სხვადასხვა რადიაციული პარამეტრის ქვეშ // მეცნიერებისა და განათლების თანამედროვე პრობლემები. – 2017. – No6.;URL: http://science-education.ru/ru/article/view?id=27215 (წვდომის თარიღი: 02/01/2020). თქვენს ყურადღებას ვაქცევთ გამომცემლობა "საბუნებისმეტყველო მეცნიერებათა აკადემიის" მიერ გამოცემულ ჟურნალებს.
სტატიები თემაზე
